新版ではまず，信頼性を高めた。Python 2.4にあった450以上のバグを修正したという。また，処理速度も上げた。特に，例外処理と文字列処理が高速になったという。そして，言語仕様を変更し，新しいモジュールを追加収録した。
言語仕様の主な変更点は以下の通り。まずは条件式の新しい書式を追加した。true/falseのどちらかを返す条件式を1行でシンプルに記述できるようにした。また，条件分岐を表現する「with」という新しい文を使えるようにした。従来はtry/finallyで表現していたものを短い行数で表現できるようになる。
プログラム冒頭のImport文も改良した。従来は，使用したいパッケージがある場所を完全に記述する必要があったが，2.5では，パッケージの場所を1回完全に指定すると，同じ場所にあるパッケージは略式表記で呼び出せるようになる。
例外処理を表現するtry/except/finally文も改良した。従来は，tryに続いてexcept文に例外に対応する処理を記述していたが，2.5ではさらにfinally文を記述できるようになった。finally文に記述した処理は，例外が発生した後でも必ず実行される。さらに，例外を示すクラスを再編成した。これにより，キーボードなどのユーザー入力による例外と，プログラムのエラーによる例外を区別しやすくなった。
新たに加わったモジュールの中で主なものは以下の五つ。まずは，「ctypes」。これは，OSやアプリケーションの共有ライブラリやDLLにおさめられた関数やデータにアクセスする機能を提供する。二つ目は「ElementTree」。これはXML文書を処理する機能を提供する。三つ目は「hashlib」。これは暗号通信で使用するハッシュ値を計算する機能を提供する。四つ目は「sqlite3」。これは，簡易的なRDBMS「SQLite」をPythonから操作するインタフェースを提供する。五つ目は「wsgiref」。WebサーバーがWebアプリケーションのために持つべきPython言語のインタフェースを定義した「WSGI」規格に基づいた簡単なWebサーバーだ。数行のコードでWebサーバーを起動できる。
